王明周， 赖 婧， 陶沿竹， 龙立书， 敖芳芳， 白 明， 洪 猛， 陆安法
(贵州省铜仁市动物疫病预防控制中心，贵州 铜仁 554300)
重大动物疫病的发生不仅给养殖业造成巨大经济损失，还会严重威胁公共卫生安全。科学制定重大动物疫病免疫程序并切实开展免疫接种，是防控重大动物疫病最有效的措施之一。及时对接种动物进行免疫抗体监测，了解免疫抗体水平，评估免疫效果，为当地政府提供科学防疫决策具有重要意义[1，2]。口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病，临床特征为口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱，易感动物主要有牛、猪、骆驼、羊、鹿等，我国列为一类动物疫病[3]。根据《2021年铜仁市动物疫病强制免疫方案》的规定，我市口蹄疫等重大动物疫病的群体免疫密度应常年保持在100%，免疫抗体合格率常年保持在70%以上。铜仁市秋季动物疫病强制集中免疫在每年的9月初开始，至11月中旬结束，主要对高致病性禽流感、口蹄疫、小反刍兽疫、猪瘟、狂犬病进行1次强制免疫。为了评估2021年秋季铜仁市口蹄疫强制集中免疫的效果，特进行此次检测，为科学防控提供参考。
1.1 样品采集采用《兽医流行病学调查与监测抽样技术手册》[4]方法，预设95%置信水平、试验敏感性100%、预定流行率10%，根据不同畜群分类采样。2021年秋季防疫结束后，于11月中旬在铜仁市10个县(区)进行采样，每个县(区)以规模养殖场为抽检对象，随机分类采样猪、牛、羊养殖场各 1个，由各县(区)动物疫病预防控制中心完成本辖区内样品采集和送样工作，市级动物疫病预防控制中心工作人员负责采样工作的监督指导。本次监测共采集10个县(区)31个养殖场的血清样品920份，其中猪血清330份、牛血清260份、羊血清330份。
1.2 主要仪器与试剂口蹄疫抗体检测试剂盒(武汉科前生物股份有限公司，批号：20211207)、酶标仪(美国佰腾仪器有限公司，型号：800TS)、恒温箱(上海乔跃电子有限公司，型号：DHP-90328)。
1.3 检测方法按照《口蹄疫诊断技术》(GB/T 18935—2018)，采用固相竞争ELISA方法进行O型口蹄疫抗体检测。检测方法严格按照说明书进行：取抗原包被板(根据样品多少可拆开分次使用)，加入稀释好的洗涤液300 μL，无需静置，甩掉孔中洗涤液，重复洗板2次，最后1次在吸水材料上拍干。将稀释好的待检血清、阴性对照、阳性对照各取50 μL加入到抗原包被板孔中，待检血清设1孔，阳性对照和阴性对照各设2孔，然后加入酶标记物50 μL至各反应孔中，置37 ℃温育30 min。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液300 μL，无需静置，甩掉板孔中的洗涤液，重复洗板5次，最后1次在吸水材料上拍干。每孔加入底物显色液100 μL，置室温(20～25 ℃)避光显色15 min。每孔加入终止液50 μL，10 min内在酶标仪上测定各孔的D450 nm值。
1.4 结果判定及统计分析试验成立条件：阴性对照D450 nm平均值与阳性对照D450 nm平均值之差≥0.5。
判定标准：S为样品孔D450 nm值，N为阴性对照D450 nm平均值，计算样品S/N值。如果S/N≤0.5，样品判为阳性；
如果S/N>0.5，样品判为阴性。检测数据运用软件SPSS 25.0进行统计分析，卡方检验差异显著性。
2.1 家禽O型口蹄疫免疫抗体检测结果由表1可见：2021年秋季铜仁市家畜O型口蹄疫免疫抗体样品平均合格率为89.35%，其中猪为75.76%，牛为93.08%，羊为100%。不同畜种之间的免疫抗体水平存在显著差异(P<0.05)，羊的抗体合格率显著高于牛和猪，牛的抗体合格率显著高于猪。场群平均合格率为90.32%，其中猪场81.82%、牛场88.89%、羊场100%。
表1 2021年秋季铜仁市家畜O型口蹄疫免疫抗体检测统计
2.2 各县(区)O型口蹄疫免疫抗体比较由表2可见：碧江区、万山区、印江自治县、德江县、沿河自治县、思南县的O型口蹄疫免疫抗体合格率均显著高于石阡县、江口县、松桃自治县、玉屏自治县(P<0.05)；
石阡县的免疫抗体合格率最低(65.56%)，未达到国家规定≥70%的免疫标准。猪O型口蹄疫样品检测中，江口县抗体合格率为45%，石阡县为0%，均低于标准要求。全市羊O型口蹄疫免疫抗体合格率最高，均为100%。
表2 不同县(区)家畜O型口蹄疫免疫抗体统计
2021年秋季铜仁市家畜O型口蹄疫的平均免疫抗体合格率达到国家规定≥70%的标准要求，其中猪为75.76%，牛为93.08%，羊为100%，基本达到预期的免疫效果。但江口县和石阡县的猪、松桃自治县的牛免疫抗体合格率未达到规定要求，需及时进行排查补免。
4.1科学免疫接种是防控重大动物疫病、保护易感动物最重要的措施之一，而评价免疫效果最常用的方法是进行免疫抗体监测。国家农业农村部规定重大动物疫病防控“以集中免疫为原则，实时免疫为补充，实行预防为主，预防与控制、净化、消灭相结合的方针”。在春、秋两季集中免疫工作中，我市主管部门组织开展大规模疫苗接种活动，力求应免尽免，以期总体达到群体免疫的基础水平。本次监测结果显示铜仁市家畜口蹄疫免疫效果总体较好，基本达到了预期的目标。一是动物疫病防控主管部门和基层动物防疫员均高度重视饲养动物的免疫防控，深入稳步推进“先打后补”免疫工作，调动了养殖主体的免疫积极性；
二是每年定期开展《动物防疫法》等相关法律法规的学习培训活动，从上到下强化各级动物防疫机构的防疫监督意识及养殖场(户)的防疫主体意识；
三是我市每年春、秋两季均要定期组织人员深入养殖地进行动物疫病防控督查，对督查中存在问题的相关养殖场及县、乡(镇)动物防疫机构进行通报，督促及时整改；
四是近年来受全国非洲猪瘟疫情的冲击，我市广大养殖场(户)明显提高了动物疫病的防控意识，积极主动配合动物防疫部门进行免疫接种。
4.2本次监测发现局部区域还存在一些问题，如：江口县猪O型口蹄疫抗体合格率为45%，石阡县甚至为0%，松桃自治县牛O型口蹄疫抗体合格率为60%，均低于农业农村部规定的标准要求。分析原因：一是相关强制免疫监督人员未监督到位，有的养殖场没有接种疫苗；
二是疫苗在运输保存过程中未按规定保存导致失效；
三是在疫苗接种过程中接种剂量过小或接种部位不当。另外，从总体上看猪O型口蹄疫免疫抗体水平显著低于牛和羊，且石阡县、江口县、松桃自治县、玉屏自治县的家畜免疫水平较低，提示各地区对O型口蹄疫的防控力度参差不齐，应加强排查，对免疫抗体不合格的场及时进行补免。本次监测由于人力、物力等资源有限，抽样场数、样品量较少，只能在一定程度上反映铜仁市家畜口蹄疫的免疫水平，在后期防控工作中应实行口蹄疫免疫和排查常态化，结合实时抗体监测，应免尽免，不足补免，做到有效防控。