龚燕萍,曹 磊,成翠娥,陆芬英,王 斌,张志成,蒋廷旺△
1.常熟市医学检验所，江苏常熟 215500；
2.苏州大学附属第一医院免疫研究所，江苏苏州 215006；
3.常熟市第二人民医院消化科，江苏常熟 215500；
4.常熟市第二人民医院重点专科实验室，江苏常熟 215500
原发性胆汁性胆管炎(PBC)是一种以自身免疫介导的肝内中小胆管的破坏损伤、肝脏门静脉管道的淋巴细胞浸润为主要特征自身免疫性肝病(AILD)[1-2]。该病好发于中老年女性(40～60岁)，其早期临床表现为轻度乏力和间歇性瘙痒，半数患者出现轻度肝大，将近1/4患者有脾大的现象[3-4]。血清学主要表现为碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰胺转肽酶(GGT)异常升高，自身免疫性抗线粒体抗体(AMA)或特异性抗核抗体(GP210、SP100)、抗早幼粒细胞白血病蛋白(PML)出现阳性[5-8]。目前为止，治疗PBC常用的药物仍然为熊去氧胆酸(UDCA)，但经过UDCA治疗后，仍有30%～40%的患者没有达到理想效果[9-10]，而PBC晚期患者除进行肝移植外，尚无有效治疗方法，而且移植术后复发率较高。目前，PBC发病机制尚不明确，可能是遗传易感性和环境触发等多因素共同作用引起自身免疫功能紊乱，导致T淋巴细胞特异性攻击胆管上皮细胞[11]。可溶性CD25(sCD25)由白细胞介素(IL)2受体α链(CD25)在免疫激活时脱落形成。因此sCD25水平升高被认为是持续免疫反应的标志，可用于监测免疫介导的疾病。在噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)和T细胞淋巴瘤等疾病中，sCD25水平显著增高，并且分别与诊断和预后相关[12-13]。在结节病等肉芽肿病中，sCD25也可用作监测疾病活动的生物标志物[14]。但在PBC患者中sCD25的表达水平鲜有文献报道，因此，本研究通过分析sCD25和IL-6在PBC患者血清中的水平及与疾病相关性，探讨sCD25在PBC临床诊疗中的作用及其潜在价值。
1.1一般资料 将2021年2月至2021年6月常熟市第二人民医院收治的37例初治PBC患者纳入研究作为PBC组，其中女性患者30例，年龄40～87岁，平均62岁；
男性患者7例，年龄38～72岁，平均60岁。体检健康者50例作为对照组，其中女性35例，年龄47～78岁，平均63岁；
男性15人，年龄34～71岁，平均57岁。两组间性别构成比、年龄差异无统计学意义(P>0.05)。PBC患者纳入标准[15]：同时具备下列3条中的2条者可诊断为PBC。(1)血清ALP、GGT升高；
(2)免疫荧光法AMA≥1∶40或者酶联免疫吸附法(ELISA)检测AMA呈阳性；
(3)肝活检组织病理学显示典型的肉芽肿性胆管炎、汇管区淋巴细胞聚集、小叶间胆管破坏、数目减少，细小胆管增生，可伴有纤维化和肝硬化。排除标准：有病毒性肝炎、药物诱导性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎者。所有研究对象均签署知情同意书。本研究取得常熟市第二人民医院伦理委员会批准。
1.2试剂与仪器 -80 ℃超低温冰箱(美国赛默飞公司),离心机(中国香港基因公司),酶标仪(美国赛默飞公司),全自动生化免疫分析仪(德国西门子公司),人源IL-6试剂盒(中国和锐公司),印迹法抗核抗体谱检测试剂盒(德国欧蒙公司),多重微珠流式荧光抗核抗体谱检测试剂盒(美国宙斯科技公司),人sCD25检测试剂盒(苏州旭光科星抗体生物科技有限公司),ALT、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、GGT检测试剂(日本世诺公司)、总胆红素(T-Bil)检测试剂盒(中国伊普诺康公司)、ALP(中国九强)。生化试剂均有对应的校准品。
1.3方法
1.3.1血清标本采集 清晨患者空腹时，采集5 mL外周静脉血，3 000 r/min，离心10 min，收集上层血清并分装，于-80 ℃超低温冰箱中保存。
1.3.2ELISA检测血清中sCD25和IL-6水平 收集所有受试对象的外周血血清，用双抗体夹心法进行人sCD25和IL-6的ELISA检测，操作过程均按照ELISA试剂盒说明书进行检测。最后依据标准品的水平和对应的吸光值建立标准曲线，带入样品的吸光值，计算sCD25和IL-6的水平。
1.3.3血清自身抗体和肝功能检测 血清自身抗体和肝功能参考课题组之前采用的方法进行分析[16]。其中自身抗体AMA采用多重微球流式荧光法和间接免疫荧光法进行检测，抗核抗体GP210和SP100采用免疫印迹法进行检测，速率法检测ALT、AST和GGT，NPP底物-AMP缓冲液法检测ALP，氧化法测定T-Bil。
2.1所有受试者的自身抗体及肝功能指标检测结果 PBC患者组及对照组的临床生化检测标志物水平见表1。所有患者的血清ALP、GGT的水均显著性升高(P<0.001)，且免疫荧光法检测PBC患者的AMA均大于1∶40，ELISA定量检测AMA也均呈阳性(弱阳性)，同时满足诊断标准的两点。患者中呈抗核抗体GP210阳性者15例，抗核抗体SP100阳性者6例。PBC患者的其余肝功能指标(AST、ALT、T-Bil)与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。
表1 PBC患者组及对照组血清生化检测指标比较
2.2PBC组与对照组血清sCD25和IL-6水平比较 与对照组相比，PBC组血清中的sCD25水平显著上升，差异有统计学意义[(920.6±78.6)pg/mLvs.(166 6.7±107.2)pg/mL，P<0.001]。PBC组血清IL-6水平较对照组明显升高，差异有统计学意义[(11.96±0.30)U/Lvs.(10.71±0.35)U/L，P=0.008]。
2.3血清中sCD25和IL-6与PBC相关核抗体间的关系 PBC组抗-GP210阴性和阳性患者的血清sCD25水平均值分别为1 389.6 pg/mL和2 073.1 pg/mL，差异有统计学意义(P<0.001)；
抗-SP100阴性和阳性组血清sCD25水平均值分别为1 590.0 pg/mL和2 063.1 pg/mL，差异无统计学意义(P=0.104)。PBC组抗-GP210阴性和阳性患者的IL-6血清水平均值分别为11.62 U/L和12.45 U/L，差异无统计学意义(P=0.170)；
抗-SP100阴性和阳性组血清IL-6水平均值分别11.87 U/L和12.86 U/L，差异无统计学意义(P=0.199)。
2.4PBC患者血清sCD25、IL-6与肝功能指标的相关性分析 进一步对PBC患者血清sCD25以及IL-6水平与肝功能各指标进行相关性分析，结果显示，血清sCD25的水平与ALT(r=0.459，P=0.028)、AST(r=0.492，P=0.020)、T-Bil(r=0.442，P=0.039)呈正相关，而血清IL-6的水平也与ALT(r=0.540，P=0.006)、AST(r=0.431，P=0.045)、ALP(r=0.506，P=0.012)、T-Bil(r=0.593，P=0.004)呈正相关，见表2。
表2 PBC患者血清sCD25、IL-6与肝功能指标相关性
2.5ROC曲线分析 sCD25取截断值1 104 pg/mL时，灵敏度为91.89%，特异度为85.19%；
IL-6取截断值10.26 U/L时，灵敏度为91.43%，特异度为52.38%，见表3、图1。由此可见，sCD25水平对PBC组和对照组具有良好的区分能力，而IL-6对PBC组和对照组的区分能力则较弱。
表3 sCD25、IL-6 ROC曲线分析结果
图1 sCD25、IL-6的ROC曲线分析
PBC是一种比较常见的胆汁淤积性肝病，以慢性、进行性、自身免疫为典型特点，其病因和发病机制尚不明确，机体内免疫功能失调可能是引起该病的原因之一[17-18]。研究报道证明多种Th1、Th2相关细胞参与了PBC的发生、发展[19]。IL-6常被用作炎症疾病的一种血清标志物，但事实上IL-6属于Th2型细胞因子，它可参与调节Th1/Th2平衡，在很多自身免疫性疾病中也具有重要的临床意义[20-21]。CD25是IL-2的受体α链(IL-2Rα)，表达于健康人静止的T淋巴细胞表面，诱导T细胞的增殖和分化[22]。由于IL-2兼有免疫激活和免疫耐受的功能，sCD25也可以通过调控传统T细胞或者调节性T细胞来实现免疫激活以及免疫耐受的不同效应[23]。由于自身免疫性疾病患者中sCD25水平的增加被认为反映了持续的疾病活动，因此可以预期sCD25通过反式激活效应细胞来参与PBC的发病过程。本研究发现，PBC患者血清中sCD25、IL-6水平显著性升高，与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.05)。将sCD25和IL-6与PBC患者肝功能指标进行Pearson相关分析发现，均与ALT、AST和T-Bil呈正相关(P<0.05)，这提示着sCD25和IL-6可能与肝脏病变的进展存在相关性。杨琼等[17]研究了40例PBC患者中IL-6水平与UDCA疗效的相关性，结果证明，PBC患者的血清IL-6水平显著升高，而且发现IL-6可能参与了PBC的发病过程，与本文研究结果一致。
抗-SP100和抗-GP210是PBC两个重要的特异性抗核抗体，因而本研究还对sCD25与IL-6的血清学水平与自身抗体之间的关系进行了初步探讨。结果发现，抗-GP210阳性组的sCD25水平较阴性组显著升高(P<0.05)，但抗-SP100阳性组的sCD25水平较阴性组有增加，但增加无统计学意义(P>0.05)，原因很可能是由于抗-SP100阳性组入组患者过少(n=6)导致；
抗-GP210和抗-SP100阳性组的IL-6水平与阴性组相比差异均统计学意义(P>0.05)，说明相较于IL-6，sCD25在临床诊断PBC中有更高的价值且与PBC的临床预后可能存在一定的相关性。ROC曲线分析发现sCD25在PBC中曲线下面积为0.893，高于IL-6的0.761，也提示在PBC中sCD25比IL-6更具有潜在应用价值。
综上所述，PBC患者sCD25水平显著高于对照组，sCD25与自身抗体抗-GP210以及患者肝功能指标存在显著的相关性。提示sCD25在PBC实验室筛查中具有潜在的应用价值。
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