摘要：沸水煮提贵州产天冬中的多糖成分并提纯；测定其对・Ｏ２－和・ＯＨ的清除作用。结果显示贵州产天冬中多糖的提取率为１３．００％；一定剂量的天冬多糖在体外对・Ｏ２－和・ＯＨ具有显著的清除作用（Ｐ＜０．０５）。
关键词：天冬；多糖；提取；抗氧化
中图分类号：Ｒ２８４．２；Ｏ６３６．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）07－1436-02
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｆｒｏｍ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ ａｎｄ Ｉｔｓ
Ａｎｄｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ａｃｔｉｖｉｔｙ
ＬＩ Ｙａｎ－ｊｕ１，ＬＩ Ｑｉｎ－ｓｈａｎ２，ＴＩＡＮ Ｓｈｕｏ２，ＬＩＵ Ｙａｎｇ３
（１． Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｂｌｏｏｄ Ｆａｍｉｌｙ， Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｇｕｉｙａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｃｈｉｎａ；
２． Ｔｅａｃｈｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １００７３０，Ｃｈｉｎａ；
３． Ｔｈｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Lｉｆｅ Sｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ， Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００２２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｂｏｉｌｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｆｒｏｍ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ． Ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｏｎ ・Ｏ２－ ａｎｄ ・ＯＨ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ １３．００％． Ａｎｄ ｔｈｅ ・Ｏ２－ ａｎｄ ・ＯＨ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｔ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｄｏｓｅ ｗere ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ； ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； extraction； ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ；
天冬（Ｒａｄｉｘ Ａｓｐａｒａｇｉ）为百合科植物天门冬（Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌｏｕｒ．）Ｍｅｒｒ．）的干燥块根［１］。国内外研究发现天冬含有丰富的多糖和寡糖，具有类激素、抗氧化、增强免疫力、抗炎、抗肿瘤等多种作用［２－７］，本试验以贵州产天冬为研究对象，提取和纯化其中的多糖，并对其体外抗氧化活性进行初步探讨，为天冬的开发利用提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 仪器和试剂
中药天冬购于贵州凤岗，３，５－二羟基甲苯购自中国药品生物制品鉴定所，其余试剂均为国产分析纯。
１．２ 试验方法
１．２．１ 天冬多糖的提取与纯化［８］ 称取干燥的贵州天冬粉末１２０ ｇ，加蒸馏水２ ０００ ｍＬ，沸水煮提６ ｈ，过滤，残渣再加蒸馏水1 ５００ ｍＬ，煮提４ ｈ。合并两次提取液，浓缩至约２００ ｍＬ，加体积分数９５％的乙醇使含醇量达到８０％，沉淀多糖，静置过夜。倾出上清液，抽滤，用６０ ｍＬ体积分数８０％的乙醇洗涤３次得粗多糖。将粗多糖加热溶于1 ０００ ｍＬ水中，用２００ ｍＬ氯仿－正丁醇（体积比为４∶１）萃取４次，除去氯仿层。母液加热浓缩至２００ ｍＬ，加体积分数９５％的乙醇使含醇量达８０％，静置过夜、抽滤、沉淀，依次用体积分数９５％的乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，８０ ℃干燥４ ｈ，得精制天冬多糖，以上方法制备天冬多糖样品６份，产品称重后计算其得率。
１．２．３ 天冬多糖抗氧化能力的测定
１）・Ｏ２－清除率的测定［９］。９ ｍＬ的ＰＢＳ ５０ ｍｍｏＬ／Ｌ（ｐＨ ８．３４）、联苯三酚０．２ ｍｍｏＬ／Ｌ，反应温度为２５ ℃，分别加入０．２、０．４、０．８ ｇ天冬多糖提取物，以不加多糖提取物的处理作对照，以ｐＨ ８．３４的ＰＢＳ作为参比，测定反应启动后１０ ｓ的Ａ３２２ ｎｍ。清除率按下式计算：
・Ｏ２－清除率＝（Ａ０－Ａ１）÷Ａ０×１００％
式中，Ａ０和Ａ１分别表示对照和添加多糖处理的Ａ３２２ ｎｍ。
２）・ＯＨ清除率的测定［１０］。邻二氮菲０．７５ ｍｍｏｌ／Ｌ、ＦｅＳＯ４ ９．７５ ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ ７．３４的ＰＢＳ １５０ μｍｏｌ／Ｌ，加入质量分数０．０１％的Ｈ２Ｏ２，３７ ℃保温６０ ｍｉｎ，加入０．４０ ｇ提取的天冬多糖，总反应体系为１０ ｍＬ。以未添加Ｈ２Ｏ２和天冬多糖的处理为阴性对照，以只添加Ｈ２Ｏ２的处理为空白对照，以同浓度多糖作参比，测定Ａ５３６ ｎｍ。
・ＯＨ清除率＝（Ａ２－Ａ０）／Ａ０×１００％
式中，Ａ０、Ａ２分别表示对照和添加多糖处理的Ａ５３６ ｎｍ。
天冬多糖抗氧化能力试验中每项处理均设置６个重复，试验结果均以ｘ±ｓ表示，并进行差异显著性分析。
２ 结果与分析
２．１ 沸水煮提法提取天冬中多糖的得率
按照１．2．１的方法提取天冬多糖，平均每１２０ ｇ干燥的天冬粉末中可提取得到１５．６ ｇ精制天冬多糖，得率为１３．００％，ＲＳＤ＝１．３６％。
２．２ 天冬多糖的抗氧化能力
２．２．１ 天冬多糖对・Ｏ２－的清除作用 加入多糖后，反应体系的Ａ３２２ ｎｍ降低，表明天冬多糖对・Ｏ２－具有清除作用（表１）。在试验浓度范围内，溶液的Ａ３２２ ｎｍ随天冬多糖添加量的增加而下降，当天冬多糖添加量为０．４ ｇ或０．８ ｇ时，反应体系的Ａ３２２ ｎｍ与不加多糖的空白对照相比有显著差异（Ｐ＜０．０５），・Ｏ２－清除率分别高达１９．３２％和３１．２４％。
２．２．２ 天冬多糖对・ＯＨ的清除作用 在本试验条件下，由Ａ５36 ｎｍ的测定值判断天冬多糖对・ＯＨ的清除作用（表２），与阴性对照相比，只添加Ｈ２Ｏ２的处理Ａ５36ｎｍ显著升高（P＜０．０５），而同时添加了Ｈ２Ｏ２和天冬多糖的处理Ａ５36 ｎｍ没有显著变化，表明天冬多糖对・ＯＨ有显著的清除能力，清除率高达５６．３８％。
３ 讨论
随着自由基研究的不断深入，氧自由基造成的组织损伤已为人们所关注。它能破坏脂类、细胞膜、核酸及染色体，影响蛋白质性质及酶的活性［１１－１３］。试验证明当机体内・Ｏ２－及・ＯＨ过多时，会产生大量脂质过氧化物（ＬＰＯ），损伤细胞膜，引起高血脂、冠心病、加速衰老等［１４－１８］。天冬为传统中药之一，在中国资源丰富，且具有多种潜在的药用价值，具有抗菌，抗肿瘤等生物活性。前人报道，中药天冬中含粘液质、寡糖等成分［１９，２０］。本试验从贵州产天冬中提取多糖的得率为１３．００％，且体外试验表明，达到一定剂量的天冬多糖对・Ｏ２－和・ＯＨ具有明显的清除作用，从而推测天冬多糖在防治心血管疾病、抗衰老、防辐射等方面的作用可能与其能清除・Ｏ２－、・ＯＨ有关，本试验可为贵州产天冬的开发与应用奠定基础。
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