[摘要]目的：通过对SKP-2及PTEN的免疫组化变化来分析手部烧伤后瘢痕挛缩的发病机制。方法：选择2009年7月～2011年12月因手部烧伤后瘢痕挛缩在我院住院的患者58例（增生性瘢痕41例，瘢痕疙瘩17例）和非挛缩瘢痕皮肤组织患者30例，采用免疫组化检测三组的SKP-2及PTEN表达情况，并且进行相关性分析。结果：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的SKP-2表达的平均光密度值也明显高于非挛缩瘢痕组织（P0.05）。
1.2 免疫组化方法：鼠抗人PTEN单克隆抗体（福州迈新生物技术公司）。SKP-2兔抗人多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司）。将选择的将组织切片在60℃恒温箱中烘烤1h、二甲苯中浸泡10min、更换二甲苯后浸泡10min，然后在无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中各浸泡5min；用PBS（北京博奥森生物技术有限公司）洗两次各3min后，在微波炉里加热0.01M枸橼酸盐缓冲溶液至沸腾后，将组织切片放入，停止加热，间隔5min（反复2次）。PBS洗三次各3min。滴加SP试剂盒中的封闭液，置入37℃恒温箱中孵育20min。滴加1：50稀释的一抗，4℃过夜。PBS洗三次各3min。滴加SP试剂盒中的生物素化二抗，置入37℃温箱中孵育15min。PBS洗三次各3min。滴加辣根酶标记链酶卵白素工作液，置入37℃温箱中孵育15min。PBS洗三次各3min。DAB显色。组织切片置于二甲苯中浸泡3min，更换二甲苯后再浸泡3min透明，分别挑选高倍镜视野下的表皮组织、成纤维细胞、血管内皮细胞中黄染区域作为测量区域，测得切片上DAB显色为棕黄色代表阳性的区域的平均光密度值（MOD），取10个视野的平均值。
2 结果
2.3 相关性分析：用Pearson相关分析法分析SKP-2和PTEN在不同组织中表达的相关性，发现不同组织中SKP-2和PTEN表达呈现负相关，相关系数为-0.521，具有统计学意义（P<0.05）。具体情况见图1。
3 讨论
近10年来，烧伤的发生率在世界范围内总体呈上升的趋势。2004年，美国烧伤患者达23.22万，治疗总费用达111.3亿美元[3]。手部烧伤后瘢痕挛缩是深度皮肤软组织创伤后的一种病理性修复结果，轻者影响患者手部状况，严重者可导致手部残疾。影响瘢痕形成的因素很多，其中瘢痕内缺氧环境起重要作用，组织内缺氧可能是诱发增生性瘢痕的关键因素[4-5]。在创面愈合过程中，成肌细胞与成纤维细胞联结而成的合胞体，使创缘皮肤与创面基底的组织相连接，其收缩使创缘带动四周正常皮肤呈向心性收缩，因而创面日益缩小。
SKP-2就是F-box蛋白家族成员之一，能特异性识别磷酸化的底物并介导其泛素化降解，是DNA复制所必需的人类F-box蛋白家族成员[6]。本文结果显示，瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的SKP-2表达的平均光密度值也明显高于非挛缩瘢痕组织（P<0.05），提示在瘢痕形成中SKP-2起了非常重要的作用，我们推测在烧伤、创伤组织的修复过程中，局部环境发生变化如持续低氧，从而导致了病理性瘢痕中各种细胞的增殖失控，凋亡减少，从而导致了瘢痕的形成[7]。
PTEN蛋白作为双特异磷酸酶，可作用于某些磷脂或蛋白激酶的位点使之脱磷酸化[8]。有报道在PTEN2/2的肿瘤细胞中，PTEN的恢复性表达能够上调P27蛋白的水平，从而诱导细胞G1期阻滞[9]。本实验中发现瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的PTEN表达的平均光密度值也明显少于非挛缩瘢痕组织（P<0.05）。据此推测，在组织创伤的异常修复中，组织中由于PTEN蛋白表达减少，抑制细胞增殖的作用减弱，瘢痕中的表皮细胞，从而导致了组织创伤修复时，大量血管内皮细胞，最终导致了疤痕形成。在相关性分析方面，两者之间的相关性并不是很强，不同组织中SKP-2和PTEN表达呈现负相关。
总之，手部烧伤后瘢痕挛缩临床上比较常见，SKP-2和PTEN蛋白共同参与了瘢痕挛缩发生、发展过程中，而且互为影响，从而有可能为瘢痕挛缩的治疗提供新的思路。
[参考文献]
[1]于冬梅，郝立君，肖志波，等. survivin和caspase-3在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达及其意义[J]. 中国美容整形外科杂志，2008，19（1）：77-80. [2]Konopka B，Janiec-Jankowska A，Czapczak D，et al.Molecular genetic defects in endometrial carcinomas microsatellite instability，PTEN and beta-catenin （CTNNB1）genes mutations[J].J Cancer Res Clin Oncol，2007，133（6）：361-371.
[3]Wang L，Wang WL，Zhang Y，et al. Epigenetic and genetic alterations of PTEN in hepatocellular carcinoma[J].Hepatol Res，2007，37（2）：389-396.
[4]郑杰，宋来君，孙红卫.Skp2和PTEN在人脑星形细胞瘤中的表达及临床意义[J]. 中国实用神经疾病杂志，2008，ll（1）：9.11.
[5]吴文艺，朱世泽，吴瑞兰等.Skp2和p27蛋白在病理性瘢痕组织中的表达和意义[J].中华整形外科杂志，2005，21（6）：448-451.
[6]王娟，郭瑞珍，陈世玖，等.皮肤瘢痕和瘢痕癌变组织中Survivin，PTEN的表达[J].肿瘤防治，2008，20（4）：312-314.
[7]汪军远.血管生成抑制因子及血管生成抑制疗法[J].国外医学情报，2012，2l（2）：11-13.
[8]Yin LR，Chen ZX，Zhang SJ，et al.Expression of phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten in liver of athymic mice and hepatocellular carcinoma and the effect of Fuzheng Jiedu Decoction[J].Worm J Gastroenterol 2008；14：108-113.
[9]Lah JJ，Cui W，Hu KQ.Effects and mechanisms of silibininol human hepatoma cell lines[J].World J Gastroenterol，2007，13（8）：5299-5305.
[收稿日期]2012-04-06 [修回日期]2012-06-27
编辑/张惠娟